Idioma: Español
Fecha: Subida: 2021-07-14T00:00:00+02:00
Duración: 22m 46s
Lugar: Curso
Visitas: 332 visitas

Prof. Francisco Martín Molina

Gene editing as tools for gene therapy.

Descripción

Cell Therapy 2021 Summer Course

Transcripción (generada automáticamente)

Muy bien, buenas tardes. En primer lugar, me gustaría agradecer a los organizadores, por la oportunidad de presentar los trabajos que venimos realizando ingenio en relación a la edición genómica; como herramienta para el tratamiento de estrategia de terapia génica. Está siendo la primera. Vamos a hablar es muy brevemente cuál es el estado del arte atraque génica convencional ico y que puedo aportar la edición genómica en este campo para después, abordar un poco qué es lo que hacemos en nuestro laboratorio. En primer lugar, es decir, que la terapia génica, lo primero que intenta es introducir material genético, modificaciones en el genoma con fines terapéuticos. Necesitamos una serie de herramientas que han de ser altamente eficaces, ser muy seguras, y para modificar las zonas diana, que son necesarias para diferentes patologías y, claro. La terapia convencional lleva ya trabajando en estos muchos años y ha conseguido altas eficacia, seguridad para muchos tipos de células diana, y eso ha dado lugar a beneficios claros en muchas patologías y esto ha dado lugar a un montón de entre 15 18 medicamentos ya aprobados por las agencias europeas y americanas de medicamentos, y esto no quiere decir que haya problemas claro. Hay muchos, hay muchas limitaciones para abordar este tipo de estrategas a otras patologías que están ahí; hay problemas, por ejemplo, de inserciones y sitios indeseados por parte de lectores, integra, silenciamiento de genes, incluso aunque se utilice como tales fisiológicos dentro de los vectores, pues esa expresión no es exactamente endógena. De dónde viene la edición y en concreto, hay muchas estrategias de edición genómica. No, nosotros nos vamos a centrar en aquellas que se basan en piezas específicas, porque son las que más, más extensa se han desarrollado. Y en qué se basa esto? Se vaya todo el mundo. Esto se centra en que vamos a ser capaces de localizar. El sitio donde queremos hacer. La modificación vamos a cortar con su núcleo, se especifica que solo cortan en ese sitio y ahora las células van a reparar ese daño. Durante ese mecanismo de reparación del daño donde nosotros podemos hacer diferentes cosas, por ejemplo, si no fijamos nada más específicas, la reparación de ese daño da lugar a nuevas mutaciones y es una mutación se puede desarrollar una estrategia para que sean capaces de eliminar, proteínas o incluso que sean capaces de lo contrario, de rescatar la expresión de una proteína. Si por otro lado utilizamos algo más que un dominador que queda a la posibilidad de rescatar, lo que hacemos es reparar la expresión de un gen que ha sido montado, pero por otra vez podemos hacer insertar casete, expresión, con completos de manera que esto es prácticamente mimetizar lo que haría, por ejemplo un vector con la diferencia, que seleccionamos dónde se va a introducir ese caso. Esto nos da un incremento de seguridad y un incremento el patrón de expresión. Por toda esta estrategia se cuál es la situación. Ahora esto se puede aplicar bueno, pues al contrario, que pasa con la estrategia convencionales, donde todo diferentes especies están muy o bastante bien estudiado. Eficacia y seguridad. Qué tipo de Estado? Pues aquí hay todavía muchos interrogantes, hay algunas patologías donde sí que se está pero donde realmente hay mucho que a pesar de estos ensayos clínicos, utilizando diferentes estrategias es aquí donde nuestro laboratorio, pues por supuesto, de haber ido trabajando solamente en aplicar las diferentes herramientas de edición genómica, sino que hemos estado muy interesados en estudiar su seguridad y eficacia, diferentes estrategias que vayamos a utilizar para abordar ese entonces, en primer lugar, una patología donde llevan más tiempo es el síndrome de Down, donde las cosas queremos estar muy seguros por el tipo de patología, es que la seguridad fueran lo más alta posible. Entonces aquí empezamos a trabajar con diferentes modelos para estudiar cómo podíamos abordar estrategias de edición, genómica, que realmente fueran más seguras y más eficaces, que las tenemos, los vectores, antivirales de ese momento, más que mejor resultado estaban dando, que son aquellos que eran derivados del archivo y con expresión fisiológica utilizando el mismo promotor de control. Entonces aquí claro, empezamos a trabajar primero nuclear, se asoman más eficaces para hacer eso el tramo de corazón con sangre o parada, para que nos dieran un núcleo de primera generación. Estas piezas tienen dos tipos de proteínas. La izquierda, la derecha, que tienen que para poder cortar en esta primera generación un homo dímelo es capaz de cortar. Tenemos otros científicos nucleares ha dirigido también a que eran de segunda generación, Muntadas donde se necesita que la izquierda se una con la derecha no tiene que ser eso, incrementa muchísimo la especificidad, y por otro lado pues teníamos un sistema crispr que fuera capaz de ir al mismo sitio, te corte de las nubes, que va un poco de las extras de las fincas, dos cortas sitio, en este corte y sistema de guías donde portaba sitios muy parecidos, dentro de 1. En ese sentido, pues empezamos a desarrollar como como estudiamos. Esto no es más específico, más seguro diseñamos este donado que nos daba la posibilidad de seleccionar clones, que fueran resistentes aéreo, indicando que se casen de expresión estaba insecto genoma de la célula diana, de manera que si cortamos aquí y se producía la edición genómica. Como nosotros queríamos. Tenemos algo así; tenemos el locos editado el cual podemos estudiar con diferentes problemas que nos daban estas estas longitudes que vemos aquí no por ejemplo si el locos no estaba editado, pues tenemos aquí la banda que debemos quedarnos con lo que se estaba editado. Aquí ves abajo, tenemos una banda mucho más elevada y tenemos, sabemos también una serie de problemas internos que no tienen que dar diferentes bandas en función del patrón y, por supuesto, tenemos un patrón interno, ser un detonador dado un fragmento que fuera donde fuera hombre, se ha insertado el ganador. Hay que ser capaces de ver cómo me suba a Tremosa, hacemos clones, y estudiamos la especificidad de cada una de las telas nucleares. Fue interesante observar que cuando utilizamos la nuclear, que era la que era capaz de erizar, pues menos del 50 por 100 de las inserciones eran sitio. Cuando utilizamos la sistema crispr, llegábamos hasta un 88 un 83 por 100 de secciones. En el sitio indicado el sitio deseado, lo cual fue interesante ver aquí que nuclear es incluso mejor, es que las temáticas pero muy parecida es tan significativa, pero sobre todo relacionaba la especificidad de corte con la especificidad de inserción del Dragón en su sitio, otro punto interesante donde estábamos interesados en ver si podían modificar, hacer algún tipo de administración a los ganadores para incrementar la eficacia y aspectos que realmente estamos por debajo del 5, dos por 100 de células capaz de ser editadas teniendo realmente eso era muy pobre para poder abarcar una estrategia de terapia se le llamó entonces un sistema de modelo con el que pudiéramos estudiar diferentes tipos de donados no diseñamos modelos de encendido y apagado muestra de apagado la célula diana. Tiene este tipo, es esto en su genoma de que es un caso que espesa rodeado de unos elementos que nosotros podemos diseñar. Frente a esos elementos, como como brazos, de manera que si se produce la recomendación homóloga -se apaga, porque esta gente está montada todo a lo largo de todo su tarea de toda su adn y lo que hacemos es insertar un casero rojo, de manera que si el sitio de inserción se producen correctamente, su recomendación a homologar tenemos que hacerla, son rojas y podemos analizar simplemente por cierto, que las zonas que son rojas y que no expresan verde se ha producido un proceso de recomendación de inserción del sitio correcto y si ocurre verde y rojo es porque los inserta en otros sitios del genoma y entonces tenemos la expresión tanto del verde como el rojo. Eso es una inserción ilegítimo. Con esto podemos detectar por ejemplo, de diferentes cosas una de las conclusiones más interesantes que si utilizamos un sitio de reconocimiento y insertados en el sitio de reconocimiento de la clase específica. En el extremo cinco prima eso incrementa casi por 10 la, la, la eficacia de recomendación. No obstante, esto es lo más interesante de ver que la cantidad de interacciones ilegítimas se mantenía muy parecida. Proporcionalmente incluso disminuía un poquito, aunque lo más importante es que incrementamos por días la eficacia, simplemente incrementando, introduciendo éxito todas estas estrategias, por supuesto, iban dirigidas a desarrollar estrategias de terapia génica. Pasada edición genómica, como he dicho, para otras patologías. En cuanto al síndrome de todos los estudios que tuvimos hablando, por casi tres años, cuatro finalmente llegaron a la conclusión antivirales, eran mejores en el balance, eficacia y seguridad, porque en aquel momento nos disponíamos de herramientas que a día de hoy se disponen básicamente, y la eficacia con la que estamos logrando va a ser muy por entonces. Nuestra conclusión fue básicamente que los ganadores eran los antivirales expresando por su propio promotor que una herramienta que llevábamos trabajando muchísimo tiempo, pero el año pasado, por ejemplo, salero, el grupo de ley, se quedaba sana y alguien frase publicaron que esto casi casi, que no es así que utilizando los sistemas de entrega adecuados, sistemas de edición genómica, pueden ser tan eficaces como los antivirales y lograr incluso beneficios un poquito superiores seguido. Veis que esto todavía tiene que cerrarse más, tenemos que se tiene que ver exactamente cómo trasladar esto a clínica, pero realmente ese es una estrategia que, como nosotros, que habíamos hipotética, podría sustituir a los antivirales en una estrategia típica donde son los ganadores, seguimos nuestro trabajando en otra patología, que me suena de Pompeo, donde seguimos también con la misma alternativa. Se puede sustituir al resto de entidades por los sistema de edición genómica, y estamos trabajando, aunque eso no voy a hablar hoy vamos, vamos a centrar en lo que queda de charla. Habla un poco como hemos trabajado, con cómo utilizar estas herramientas de edición; genómica para mejorar estrategia de inmunoterapia, y aquí no no hacemos sustitución, sino la idea es combinar antivirales con estrategias de edición; genómica para intentar diseñar nuevos nuevos o ingeniero; usar células, combinando ambas, ambas esto lo vamos a hacer en concreto para intentar mejorar las que las aunque se pudiera utilizar para otras es otro tipo de estrategias. Lo que vamos a centrarnos ahora es de cartel como todos conocéis, pues es una estrategia, está rompiendo cómo hacer terapia o cómo hacer inmunoterapia simplemente haciendo inmunoterapia génica, se a la idea es utilizar células del propio paciente, generalmente se aisla; se modifican con vectores por ahora la mayor parte de la estrategia; son vectores virales. Entonces estaba estable entidades codifican por con un dominio que va a conocer el antígeno tumoral y ahora tenemos células, que son las que llamamos células Son capaces de reconocer y eliminar tumorales cinco medicamentos aprobados para no ver, y lo cual indica que tan poco tiempo se eso es un campo muy prometedor a pesar de eso, pues hay. Captación de un 40 por 100 de leucemia páginas vuelve, hay una falta de eficacia y, por supuesto, muy fuerte en tumores sólidos, muchísimos efectos secundarios, y algunos de ellos letales, y por otro punto importante, es que, como las células vienen de los propios pacientes, hay una limitación en el tiempo de producción y también en la liquidación, la calidad de la fase de esos pacientes. Con todo esto, pues en nuestro laboratorio llevamos tiempo trabajando en cómo mejorar esto Electoral, entidades, intentando controlar la expresión de o bien descaro de otros genes de manera endógena o exógenos, o bien, y esto, combinado con estrategias de edición genómica. Esa estrategia es genómica, sobre todo, aportando dos aspectos principales. Por un lado, ser capaces de hacer esas células sean seat, sean universales, que puede ser un donante para hacerlas, o que seamos capaces de eliminar puntos de control del sistema, inmune punto de control que tienen todos tumores. Tienen para bloquear la actividad de intentar que esas que esos frenos no existan en las células. De todas maneras, hoy vamos a centrarnos en estos dos puntos. Vamos a centrarnos en cómo hemos combinado. Los sistemas que tenemos en el laboratorio para generar de versátil y de cualquier manera decir que seamos capaces de inducir la expresión de cualquier género solamente el receptor, sino podemos inducir citoquinas, podemos inducir cualquier molécula que creamos conveniente para incrementar la potencia y que queramos hacer de manera externa que pueda controlar. Cuando quiere expresar eso es ese es la idea de nuestro sistema. La idea es que sea libre de activadores. Para que se pueda utilizar, que sea una dosis muy bajas de disciplina para que se aplicar este sistema es que queremos combinar con la estrategia de eliminar de ferry o para hacer las obsesiones a partir de donantes sanos, y voy a presentar una datos sobre breves en relación a esto. Para hacer un cerca de un donante sano tiene un problema, porque no sólo todo lo vamos a tener dos tipos de problemas principales. Por un lado, vamos a tener que hacerlo es capaz de atacar al recipiente, eliminando células del donante y produciendo en forma de Egipto contra el huésped, y, por otro lado más las células huésped, que van a atacar a los operarios, rechazó anular poco tiempo y no tener un efecto deseado en este sentido, pues nuestro aprovechar ahora mismo es eliminar o bien solamente el tecer, o bien ser para evitar; son isis, y para evitar el rechazo y esto combinado con los antivirales, estamos en el laboratorio en principio para expresar como prueba de concepto, pero nuestro objetivo principal no es ése, sino es más intentar expresar citoquinas, altamente activas en conjunto expresado de manera fisiológica, pero a día de hoy vamos a mostrar aquí solamente concepto de ser capaz, de generar carácter y para ello puesto primero ese, generar un antiviral, que espese el car de manera traducir y a posteriori, utilizar un sistema de edición genómica, basado en crispr, en concreto, proteínas que después de muchas esperanzas fue con mucha diferencia, que mejor resultado nos dio con ellos por encima del 80 por 100 en muchísimas ocasiones y base básica antes, por encima del 70 casi siempre es muy, muy eficaz para eliminar pcr, y, una vez que tenemos es todo lo que vamos a tener. Son zonas calvas, por ahora tenemos todavía tenemos la veta 2, tenemos en este sistema, pero ya el tc por lo menos evita ser contra y ser capaces de que solamente expresen el en presencia de dos minas, se añade esto sí disciplina, estas células expresaran, si no, y si le quitas o revertir el proceso, y dejaremos de pesar de esto lo vemos aquí; en este estadio positivas, con resultados reales, donde estás solo tres negativas expresa una vez traducidas con el con este vector, pues tenemos que si no tenemos todo a pesar de estar integrado el vector, su genoma, pues no es solamente la presencia de despertar a esta expresión y tendremos expresión de estas. Ahora son capaces de eliminar las células diana. Solamente lo interesante es que este sistema no tienen tras activadores, con lo cual no va a activar otros genes, como ocurre con los sistemas tradicionales, y que, además, La dos dos disciplinas que se utilizan es realmente baja, con 0, un nanogramos. Tenemos ya empezando a tener respuesta y con un nanogramos tenemos expresión más. Esto es entre 50 100 veces más sensible que cualquier sistema de escribir. Queremos un poquito más allá e intentamos eliminar tanto el tecer como la heroína. Todo aquí hubo un poco más de problemas, tenemos distintas estrategias para hacer la la, la prueba de toxicidad, problemas de que acepten si el cargo al que obviamente aquí a final logramos con unos diseños de nuevos núcleos, proteína, combinando dos días frente al exterior, ha vetado en diferentes sitios y conseguimos un doble no que como veis aquí de prácticamente del 75 por 100, que puede ser un poquito mayor, si se cortamos aquí podemos tener prácticamente el 80 por 100 de las alas en los dos locos, una vez que éste estaba puesta a punto, procedemos a hacerlo, lo hicimos anteriormente, vamos primero con los antivirales, en este caso no utilizamos, inducirle. Será lo que queríamos buscar, era si ver si esta son funcionales. Más adelante, ya buscaremos la imposibilidad. Aquí utilizamos un vector de tercera generación y vimos que bueno el 40 por 100 de la de las células eran capaces de expresar el car. Analizamos la funcionalidad y vimos que efectivamente, pues somos capaces de que si enfrentamos la diana, aquí lo vemos con doble caos que no tienen el car, pues no somos capaces de eliminar. Las setas son acelere, sino positivas. Si esas la expresas, el caos ahora son capaces de eliminar por completo la plantilla completa en 24 horas prácticamente esto fue en paralelo con células, que no habían sido editadas, y la eficacia es exactamente la misma que conseguimos editar lo más eficaz ha doble 2. Genes sin eliminar la capacidad de las células, y, bueno ya con tres mensajes. En cuanto a lo que nosotros marcha un laboratorio, pues bueno, a pesar de que estaban claramente el sistema de edición genómica de digamos ganador por versatilidad economía etc no hay que olvidar las otras estrategias, como la física nuclear, que son muy buenas, herramientas para trabajar debido sobre todo a su especificidad. Tenemos también que en cuanto a ganador decir que es bueno, si el hecho de insertar el sitio de corte de propio se especifica en cinco prima. Eso va a ganar en eficacia, sin quitar especificidad, incluso a veces ganando el diseño ganador, y, por último, que decir qué bueno que la combinación de la herramienta de edición genómica con las herramientas tradicionales de terapia génica, está abriendo el campo abriendo la posibilidad de ingeniería de linfocitos muy elevada y fuerte, y esto va a dar seguramente muchos logros futuros en el campo de la inmunoterapia y no quiero terminar así sin decir. Qué bueno que, a pesar de que yo ayer trabajando en el laboratorio, haya presentado solamente estrategias de edición genómica basadas en clases específicas, a día de hoy se están desarrollando el campo, se está en sesión continua, están desolados nuevas tecnologías de edición, que ya no requieren corte, y eso es un beneficio muy fuerte para la seguridad, y esto va a tener beneficios claros en el futuro y traslación clara genérica, utilizando herramientas como aprender o esposa, y solamente que tengamos eso y nada más terminar dando el agradecimiento es a la gente que participaban en los trabajos presentados en toda la parte de modelos de trabajo para estudiar eficacia y seguridad económica, sobre todo ahora hacer y ha estado trabajando Sabina, por supuesto cariño de la lector. Sus estudios, con Alejandra y Almudena han estado presentes Torre, Tío de Cartes y edición genómica, tanto en Cádiz como con dos cabras. Han sido, sobre todo dirigida por Marina Cortijo y Cristina Pablo, y todo lo que tengan que ver tanto María Tristán como Noelia Maldonado. Pues esto es todo eso. Muchas gracias por su atención. No podemos.

Propietarios

Ana Gimenez Cayuela

Comentarios

Nuevo comentario

Relaccionados